Author: Arakawa Rachel Bagashev Asen Song Li Maurer Kelly Sullivan Kathleen E.
Publisher: NRC Research Press
ISSN: 1208-6002
Source: Biochemistry and Cell Biology, Vol.88, Iss.6, 2010-12, pp. : 899-906
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Abstract
LRRFIP1 has been identified as a regulator of toll-like receptor (TLR) pathway signaling; however, little is known about its own regulation and function. This study was undertaken to characterize the biochemical properties and its regulation. Over-expression of full length LRRFIP1 led to enhanced responses to lipopolysaccharide (LPS). We examined its expression in monocytic cell lines because they express a broad range of TLRs. We found that its level of expression was not altered by LPS or phorbol myristate acetate (PMA) but that it was up-regulated by nicotine, influenza infection, and serum starvation. Phosphorylation was examined because of the bioinformatically predicted serine phosphorylation sites. Serine phosphorylation was detected and was altered by both poly I:C and nicotine. Finally, we examined the regulation of intracellular localization in response to dsRNA and found that LRRFIP1 colocalized with labeled dsRNA in monocyte lysosomal structures but not with lysosomes lacking dsRNA. These data suggest that LRRFIP1 is phosphorylated in response to immunologic stimuli and it is directed to lysosomal structures.La protéine LRRFIP1 est un régulateur de la voie de signalisation des récepteurs de type Toll (TLR) ; cependant, on connaît peu de choses sur sa propre régulation et sa fonction. Cette étude a été entreprise afin de caractériser ses propriétés biochimiques et sa régulation. La surexpression d’une LRRFIP1 de pleine longueur a conduit à une réponse accrue au LPS. Nous avons examiné son expression dans des lignées monocytiques car celles-ci expriment une grande variété de TLR. Nous avons trouvé que son niveau d’expression n’était pas affecté par le LPS ou le PMA, mais qu’il était augmenté par la nicotine, l’infection par le virus de l’influenza et la privation de sérum. Sa phosphorylation a aussi été examinée car les analyses bioinformatiques ont prédit la présence de sites de phosphorylation sur sérines. La phosphorylation de sérines a été détectée et elle était modifiée par le poly I:C et la nicotine. Finalement, nous avons examiné la régulation de sa localisation intracellulaire en réponse à l’ARNdb et nous avons trouvé que la LRRFIP1 était localisée conjointement avec l’ARNdb marqué dans les structures lysosomales des monocytes, mais pas dans les lysosomes dépourvus d’ARNdb. Ces résultats suggèrent que la LRRFIP1 est phosphorylée en réponse à des stimuli immuns et qu’elle est dirigée vers des structures lysosomales.
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