An efficient field screening procedure for identifying transposants for constructing an Ac/Ds-based insertional-mutant library of rice

Author： Luan Wei-Jiang He Cheng-Kun Hu Guo-Cheng Dey Moul Fu Ya-Ping Si Hua-Min Zhu Li Liu Wen-Zhen Duan Faping Zhang Hong Liu Wen-Ying Zhuo Ren-Ying Garg Ajay Wu Ray Sun Zong-Xiu

Publisher： NRC Research Press

ISSN： 0831-2796

Source： Genome, Vol.51, Iss.1, 2008-01, pp. : 41-49

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Abstract

An efficient system was developed, and several variables tested, for generating a large-scale insertional-mutagenesis population of rice. The most important feature in this improved Ac/Ds tagging system is that one can conveniently carry out large-scale screening in the field and select transposants at the seedling stage. Rice was transformed with a plasmid that includes a Basta-resistance gene (bar). After the Ds element is excised during transposition, bar becomes adjacent to the ubiquitin promoter, and the rice plant becomes resistant to the herbicide Basta. In principle, one can plant up to one million plants in the field and select those plants that survive after spraying with Basta. To test the utility of this system, 4 Ds starter lines were crossed with 14 different Ac plants, and many transposants were successfully identified after planting 134 285 F₂ plants in the field. Over 2 800 of these transposants were randomly chosen for PCR analysis, and the results fully confirmed the reliability of the field screening procedure.Un système efficace a été développé, en testant différentes variables, pour la production à grande échelle d’une population de mutants insertionnels chez le riz. La caractéristique la plus importante de ce système de mutagenèse Ac/Ds est que l’on peut facilement procéder à un criblage à grande échelle au champ et sélectionner des transposants au stade plantule. Le riz a été transformé avec un plasmide qui comprend un gène de résistance au Basta (gène bar). Après excision de l’élément Ds qui survient lors de la transposition, le gène bar se retrouve sous le contrôle du promoteur de l’ubiquitine et le plant de riz devient résistant à l’herbicide Basta. En principe, on peut planter jusqu’à un million de plantes au champ et sélectionner les plantes qui survivent à l’application de Basta. Afin de vérifier l’utilité de ce système, 4 lignées Ds initiales ont été croisées avec 14 lignées Ac différentes et plusieurs transposants ont été identifiés suite à la plantation de 134 285 plants F₂ au champ. Plus de 2 800 ce des transposants ont été choisis aléatoirement pour analyse PCR et les résultats de ces analyses ont confirmé la fiabilité de la procédure de sélection au champ.