Paternity determination of interspecific rhododendron hybrids by genomic in situ hybridization (GISH)

Author： Czernicka Małgorzata Mścichowska Anna Klein Maria Muras Piotr Grzebelus Ewa

ISSN： 0831-2796

Source： Genome, Vol.53, Iss.4, 2010-04, pp. : 277-284

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Abstract

Genomic in situ hybridization (GISH) has been proved to be the most effective and accurate technique for confirmation of hybrid character. The objective of our study was to adapt and optimize a GISH protocol for identification of donor chromatin in hybrids obtained by interspecific crosses between five Rhododendron taxa (R. aureum, R. brachycarpum, R. catawbiense ‘Catharine van Tol’, R. catawbiense ‘Nova Zembla’, and R. yakushimanum ‘Koichiro Wada’). Positive results were obtained only when we used mitotic chromosome spreads prepared from anthers. The best differentiation of maternal and paternal chromosomes in hybrid genomes was obtained when 50 ng of probe was applied together with blocking DNA at a concentration of 3.0 µg/µL. The results demonstrate that GISH is a practical tool for detection of alien genomes and analysis of the constitution of the chromosomes in rhododendron hybrids.L’hybridation génomique in situ (GISH) est reconnue comme étant la technique la plus efficace et précise pour confirmer le statut hybride. L’objectif de cette étude était d’adapter et d’optimiser le protocole GISH pour l’identification de la chromatine étrangère au sein d’hybrides issus de croisements interspécifiques entre cinq espèces du genre Rhododendron (R. aureum, R. brachycarpum, R. catawbiense ‘Catharine van Tol’, R. catawbiense ‘Nova Zembla’ et R. yakushimanum ‘Koichiro Wada’). Des résultats positifs ont été obtenus uniquement en employant des étalements de chromosomes mitotiques provenant des anthères. La meilleure différenciation des chromosomes paternels et maternels au sein de génomes hybrides a été obtenue lorsque 50 ng de sonde ont été employés avec 3,0 µg/µL d’agent bloquant. Les résultats obtenus démontrent que la technique GISH constitue un outil pratique pour la détection de génomes étrangers et l’analyse de la constitution des chromosomes chez des rhododendrons hybrides.